გრამის შეღებვა არის სწრაფი ტექნიკა და გამოიყენება ქსოვილის ნიმუშში ბაქტერიების არსებობის დასანახად და ბაქტერიების კლასიფიკაციისათვის გრამდადებითი ან გრამუარყოფითი, მათი უჯრედის კედლების ქიმიური და ფიზიკური თვისებების საფუძველზე. გრამის ლაქა თითქმის ყოველთვის გამოიყენება როგორც პირველი ნაბიჯი ბაქტერიული ინფექციის დიაგნოსტიკაში.
ეს შეღებვის ტექნიკა დაერქვა დანიელ მეცნიერს ჰანს კრისტიან გრამს (1853 - 1938), რომელმაც შეიმუშავა ეს ტექნიკა 1882 წელს და გამოაქვეყნა იგი 1884 წელს, როგორც ტექნიკა, რომ განასხვავოს ორი სახის ბაქტერია მსგავსი კლინიკური სიმპტომებით: Streptococcus pneumoniae (ასევე ცნობილია როგორც Streptococcus pneumoniae). პნევმოკოკები) და ბაქტერიები Klebsiella pneumoniae.
ნაბიჯი
3 მეთოდი 1: მიკროსკოპის სლაიდების მომზადება
ნაბიჯი 1. მოემზადეთ ლაბორატორიაში სამუშაოდ
ატარეთ ხელთათმანები და გრძელი თმის ჰალსტუხი, რათა თავიდან აიცილოთ ნიმუშის ბაქტერიული დაბინძურება, რომელსაც თქვენ ატარებთ. გაწმინდეთ სამუშაო ადგილი გამწოვის ქვეშ, ან სხვა კარგად ვენტილირებადი ადგილის ქვეშ. სანამ დაიწყებთ შეამოწმეთ ბუნსენის სანთურა და დარწმუნდით, რომ მიკროსკოპი მუშაობს გამართულად.
ნაბიჯი 2. მიკროსკოპის შუშის სტერილიზაცია
თუ შუშის სლაიდი ბინძურია, დაიბანეთ საპნის წყლით, რომ ამოიღოთ ზეთი და ჭუჭყი. გაასუფთავეთ სლაიდები ეთანოლით, მინის გამწმენდით ან თქვენი ლაბორატორიის სხვა მეთოდით.
ნაბიჯი 3. განათავსეთ ნიმუში მინის სლაიდზე
თქვენ შეგიძლიათ გამოიყენოთ გრამის ლაქების ტექნიკა, რათა დაგეხმაროთ ბაქტერიების იდენტიფიცირება სამედიცინო ნიმუშში, ან პეტრინის ჭურჭელში მყოფი ბაქტერიების კულტურაში. საუკეთესო შედეგისათვის გამოიყენეთ გრამის ლაქა ნიმუშის წვრილ დარტყმებზე. მიზანშეწონილია გამოიყენოთ ნიმუშები, რომლებიც 24 საათზე ნაკლებია, ვინაიდან ხანდაზმულმა ბაქტერიამ შეიძლება დააზიანოს მათი უჯრედის კედლები და არ მოახდინოს რეაგირება გრამ შეღებვაზე.
- თუ იყენებთ ქსოვილის ნიმუშს, დაამატეთ 1-2 წვეთი მინის სლაიდზე. თანაბრად გადაანაწილეთ სლაიდზე, რათა ჩამოყალიბდეს ნიმუშის შესხურების თხელი ფენა, გადაასრიალეთ იგი სხვა სტერილური მინის სლაიდების კიდეების გამოყენებით. გააშრეთ შემდეგი ნაბიჯის გადადგმამდე.
- თუ თქვენ იღებთ ბაქტერიას პეტრი კერძიდან, გაასტერილეთ საინექციო მარყუჟი ბუნსენის სანთურში სანამ არ ანათებს, შემდეგ მიეცით გაგრილება. გამოიყენეთ მარყუჟი იმისათვის, რომ სტერილური წყალი გადაიტანოთ სლაიდზე, შემდეგ გაასტერილეთ და კვლავ გააციეთ სანამ გამოიყენებთ ბაქტერიების მცირე ნიმუშის შესაგროვებლად. ამის შემდეგ ნაზად აურიეთ.
- ბულიონში მომზადებული ბაქტერიები კვლავ უნდა აურიოთ ვორტექსერის გამოყენებით, შემდეგ კი აიღოთ ინოკულაციის მარყუჟით, როგორც ზემოთ, წყლის დამატების გარეშე.
- თუ თქვენ გაქვთ ნაცხის ნიმუში (ჩვეულებრივ გაკეთებულია პატარა ბამბის წვერით), შეეხეთ და ნაზად გადაატრიალეთ ტამპონი სლაიდზე.
ნაბიჯი 4. ოდნავ მაღალ ტემპერატურას შეუძლია კარგი ნაცხის გაკეთება
სითბო შეინარჩუნებს ბაქტერიას სლაიდზე, ასე რომ ისინი ადვილად არ იშლება შეღებვის პროცესში. ორჯერ სამჯერ შეეხეთ სლაიდს ბუნსენის სანთურაზე, ან გააცხელეთ სლაიდი ელექტრო სლაიდების გამათბობელზე. არ გაცხელდეთ, ნიმუში შეიძლება დაზიანდეს. თუ თქვენ იყენებთ ბუნსენის სანთურს, ის უნდა იყოს პატარა, მაგრამ ლურჯი ალი დიდი ნარინჯისფერი ალის ნაცვლად.
გარდა ამისა, ნაცხის გაკეთება შესაძლებელია მეთანოლით, მშრალი ნაცხის 1-2 წვეთი მეთანოლის დამატებით, დარჩენილი მეთანოლის გაშრობა სლაიდზე, ღია ცის ქვეშ დატოვებით. ეს ტექნიკა ამცირებს უჯრედის დაზიანებას და უზრუნველყოფს სუფთა სლაიდების სურათის ფონს
ნაბიჯი 5. განათავსეთ სლაიდი შეღებვის უჯრაზე
შეღებვის უჯრები დამზადებულია ლითონის, მინის ან ზედაპირული პლასტმასის ფირფიტებისგან, რბილი ბადე თავზე. მოათავსეთ სლაიდები ამ ბადეების თავზე, ისე რომ თქვენ მიერ გამოყენებული სითხე გადაიტანოს უჯრაში.
თუ თქვენ არ გაქვთ საღებარი უჯრა, შეგიძლიათ პლასტიკური უჯრაზე მოათავსოთ სლაიდი ყინულის კუბების დასაბეჭდად
მეთოდი 2 დან 3: გრამის ლაქების პროცესი
ნაბიჯი 1. დაასხით ბროლის იისფერი სითხე ნაცხზე
გამოიყენეთ პიპეტი, რათა დაასხათ ბაქტერიის ნიმუში რამდენიმე წვეთი ბროლის იისფერი საღებავით, ასევე ცნობილი როგორც გენტი იისფერი. დატოვე 30-60 წამი. ბროლის იისფერი (KV) წყალხსნარში იყოფა KV+ და ქლორიდის (Cl-) იონებად. ეს იონები აღწევენ გრამდადებითი და გრამუარყოფითი ბაქტერიების უჯრედულ კედლებსა და უჯრედულ მემბრანებში. KV+ იონი ურთიერთქმედებს ბაქტერიული უჯრედების უარყოფითად დამუხტულ კომპონენტებთან, რაც უჯრედებს აძლევს მეწამულ ფერს.
ბევრ ლაბორატორიაში გამოიყენება "ჰაკერის" ბროლის იისფერი, რომელიც შეიცავს ამონიუმის ოქსალატს ნალექების თავიდან ასაცილებლად
ნაბიჯი 2. ნაზად ჩამოიბანეთ ბროლის იისფერი
დაიხარე სლაიდი და გამოიყენე გამრეცხი ბოთლი სლაიდზე გამოხდილი ან ონკანის წყლის მცირე ნაკადი. წყალი უნდა გადმოდიოდეს ნაცხის ზედაპირზე და არ უნდა იყოს შესხურებული პირდაპირ ნაცხზე. არ ჩამოიბანოთ ზედმეტად. მას შეუძლია ამოიღოს შეღებვა გრამდადებითი ბაქტერიებიდან.
ნაბიჯი 3. ჩამოიბანეთ ნაცხი იოდით, შემდეგ ჩამოიბანეთ
გამოიყენეთ საწვეთური ნაცხის იოდის დასაბანად. დატოვე იგი მინიმუმ 60 წამის განმავლობაში, შემდეგ ჩამოიბანე ფრთხილად ისევე, როგორც ზემოთ. იოდი, უარყოფითად დამუხტული იონის სახით, ურთიერთქმედებს KV+-თან და ქმნის დიდ კომპლექსურ კომპლექსს კრისტალ იისასა და იოდს შორის (CV-I რთული კომპლექსი) უჯრედის შიდა და გარე ფენებში. ნაერთების ეს კომპლექსი შეინარჩუნებს კრისტალური იისფერი იისფერ ფერს უჯრედის შიგნით, შეღებილ ადგილებში.
იოდი არის კოროზიული ნივთიერება. მოერიდეთ ინჰალაციას, მიღებას ან კანთან კონტაქტს
ნაბიჯი 4. დაამატეთ ფერის გამათეთრებელი, შემდეგ სწრაფად ჩამოიბანეთ
ამ მნიშვნელოვანი ნაბიჯისათვის ჩვეულებრივ გამოიყენება აცეტონისა და ეთანოლის 1: 1 ნარევი, რომელიც ფრთხილად უნდა იყოს განსაზღვრული. განათავსეთ სლაიდი გარკვეული კუთხით, შემდეგ დაამატეთ ფერადი გაუფერულება, სანამ აღარ იისფერი არ ჩანს წყალში, რომელიც გამოიყენება გამრეცხვისთვის. ამას ჩვეულებრივ 10 წამზე ნაკლები დრო სჭირდება, ან კიდევ უფრო ნაკლებ დროს, თუ მათეთრებელი შეიცავს აცეტონის მაღალ კონცენტრაციას. დაუყოვნებლივ შეაჩერე ეს ნაბიჯი, წინააღმდეგ შემთხვევაში საღებავი ასევე გაუშვებს ბროლის იისფერს გრამდადებითი და უარყოფითი უჯრედებიდან და შეღებვის პროცესი უნდა განმეორდეს. დაუყოვნებლივ ჩამოიბანეთ ზედმეტი ფერის გამათეთრებელი წინა ტექნიკით.
- სუფთა აცეტონი (95%+) შეიძლება გამოყენებულ იქნას როგორც შემცვლელი. რაც უფრო მეტ აცეტონს იყენებთ, მით უფრო სწრაფად იმუშავებს გაუფერულება, ასე რომ თქვენ მეტი ყურადღება უნდა მიაქციოთ დროს.
- თუ თქვენ გიჭირთ ამ ნაბიჯის დროის თვალყურის დევნება, დაამატეთ ფერადი მათეთრებელი წვეთ -წვეთად.
ნაბიჯი 5. წაისვით ნაცხის საწინააღმდეგო საღებავი, შემდეგ ჩამოიბანეთ
საწინააღმდეგო ლაქა, ჩვეულებრივ საფრანინი ან ფუქსინი, გამოიყენება გრამუარყოფითი და გრამდადებითი ბაქტერიების კონტრასტის გასაზრდელად. შემდეგ ჩამოიბანეთ.
ფუქსინი ინტენსიურად შეაფერხებს ბევრ გრამუარყოფითი ბაქტერიას, როგორიცაა Haemophilus spp და Legionella spp. ეს მეთოდი კარგია დამწყებთათვის
ნაბიჯი 6. მშრალი სლაიდი
თქვენ შეგიძლიათ გააშროთ ისინი ღია ცის ქვეშ გასაშრობად, ან გააშროთ ამ მიზნით გაყიდული ბიბლიური ქაღალდის გამოყენებით.გრამის შეღებვის პროცესი დასრულებულია.
მეთოდი 3 -დან 3 -დან: შეღებვის შედეგების შემოწმება
ნაბიჯი 1. მოამზადეთ სინათლის მიკროსკოპი
მოათავსეთ სლაიდი მიკროსკოპის ქვეშ. ბაქტერიები ძალიან განსხვავდებიან ზომით, ამიტომ მთლიანი საჭირო გადიდება იცვლება 400x– დან 1000x– მდე. უფრო მკვეთრი გამოსახულებისთვის რეკომენდებულია ობიექტური ლინზა ჩასაფრების ზეთით. ჩაასხით ჩაძირვის ზეთი სლაიდზე, თავიდან აიცილეთ მოძრაობა წვეთისას, რათა თავიდან აიცილოთ ბუშტუკების წარმოქმნა. გადაიტანეთ მიკროსკოპის ლინზის სახელური ისე, რომ ობიექტური ობიექტივი ჩავარდეს ადგილზე და შეეხოს ზეთს.
ნავთობის ჩაძირვა შეიძლება გამოყენებულ იქნას მხოლოდ სპეციალურად შემუშავებულ ლინზებზე და არა "მშრალ" ლინზებზე
ნაბიჯი 2. შეეცადეთ ამოიცნოთ გრამდადებითი და გრამუარყოფითი ბაქტერიები
შეისწავლეთ სლაიდი მსუბუქი მიკროსკოპის ქვეშ. გრამდადებითი ბაქტერიები მეწამული ფერისაა, რადგან ბროლის იისფერი ხაფანგშია უჯრედის სქელ კედელში. გრამუარყოფითი ბაქტერიები იქნება ვარდისფერი ან წითელი ფერის, რადგან ბროლის იისფერი ირეცხება უჯრედის თხელი კედლებით, სადაც შემოდის ვარდისფერი საწინააღმდეგო საღებავი.
- თუ ნიმუში ძალიან სქელია, შედეგი შეიძლება იყოს ცრუ დადებითი. შეღებეთ ახალი ნიმუში, თუ ის აჩვენებს ყველა გრამდადებით ბაქტერიას, რათა დარწმუნდეთ, რომ შედეგი სწორია.
- თუ ძალიან ბევრ ფერს იყენებთ, შედეგი შეიძლება იყოს ცრუ უარყოფითი. შეღებეთ ახალი ნიმუში, თუ ის აჩვენებს გრამ უარყოფით ბაქტერიებს, რათა დარწმუნდეთ, რომ შედეგი სწორია.
ნაბიჯი 3. შეადარეთ შედეგები, რომელსაც ხედავთ საცნობარო სურათთან
თუ არ იცით როგორ გამოიყურება ბაქტერია, შეისწავლეთ საცნობარო სურათების კოლექცია, ჩვეულებრივ დალაგებულია ფორმისა და გრამის ლაქების მიხედვით. თქვენ ასევე შეგიძლიათ ნახოთ ონლაინ მონაცემთა ბაზები [ეროვნული მიკრობული პათოგენების მონაცემთა ბაზა, ბაქტერიები ფოტოებში და სხვა მრავალი ონლაინ საიტი. იდენტიფიკაციის გასაადვილებლად ქვემოთ მოცემულია ბაქტერიების მაგალითები, რომლებიც ხშირად გვხვდება ან მნიშვნელოვანია დიაგნოზისთვის, კლასიფიცირებულია გრამ სტატუსისა და ფორმის მიხედვით.
ნაბიჯი 4. გრამდადებითი ბაქტერიების იდენტიფიცირება მათი ფორმის მიხედვით
ბაქტერიები შემდგომში კლასიფიცირდება მათი ფორმის მიხედვით მიკროსკოპის ქვეშ, ყველაზე ხშირად კოკები (სფერული) ან წნელები (ცილინდრული). აქ მოცემულია გრამდადებითი ბაქტერიების (მეწამური ფერის) მაგალითები მათი ფორმის მიხედვით:
- გრამდადებითი კოკი ჩვეულებრივ სტაფილოკოკები (იგულისხმება ჯგუფის კოკები) ან სტრეპტოკოკები (რაც ნიშნავს ჯაჭვურ კოკებს).
- გრამდადებითი წნელები, როგორიცაა ბაცილიუსი, კლოსტრიდიუმი, კორინებაქტერია და ლისტერია. როდ ბაქტერია Actinomyces spp. ჩვეულებრივ აქვს ტოტები ან ძაფები.
ნაბიჯი 5. გრამუარყოფითი ბაქტერიების იდენტიფიცირება
გრამუარყოფითი ბაქტერიები (ვარდისფერი ფერი) ხშირად იყოფა სამ ჯგუფად. კოკები სფერული ფორმისაა, წნელები გრძელი და თხელია, ხოლო კოკოიდური წნელები შუაშია.
- გრამუარყოფითი კოკები ყველაზე გავრცელებულია Neisseria spp.
- გრამუარყოფითი წნელები მაგ. E. coli, Enterobacter, Klebsiella, Citrobacter, Serratia, Proteus, Salmonella, Shigella, Pseudomonas და მრავალი სხვა. Vibrio cholerae შეიძლება ჩაითვალოს როგორც ჩვეულებრივი ღერო ან მოხრილი ღერო.
- გრამუარყოფითი "კოკოიდი" (ან "კოკობაცილი") როდ ბაქტერია მაგალითად, ბორდეტელა, ბრუცელა, ჰემოფილუსი და პასტერელა
ნაბიჯი 6. ყურადღებით შეამოწმეთ შედეგები შერეულია თუ არა
ზოგიერთი ბაქტერია ძნელია ზუსტად შეღებვა, მათი უჯრედის კედლების მტვრევადობის ან ცვილისებრი ბუნების გამო. ამ ბაქტერიამ შეიძლება აჩვენოს მეწამული ან ვარდისფერი ნარევი ერთსა და იმავე უჯრედში, ან სხვადასხვა უჯრედებს შორის ერთი და იგივე ნაცხში. 24 საათზე მეტი ასაკის ბაქტერიულ ნიმუშებს შეუძლიათ აჩვენონ ეს პრობლემა, მაგრამ ასევე არსებობს ზოგიერთი ბაქტერიული სახეობა, რომელთა შეღებვაც ძნელი რჩება შერჩევის ნებისმიერ ასაკში. ეს ბაქტერიები საჭიროებენ უფრო სპეციალიზებულ ტესტებს იდენტიფიკაციისთვის, როგორიცაა მჟავა-სწრაფად შეღებვა, ბაქტერიულ კულტურაში დაკვირვება, TSI კულტურის მედია ან გენეტიკური ტესტირება.
- Actinomyces, Arthobacter, Corynebacterium, Mycobacterium და Propionibacterium spp. ყველა გრამდადებითი ბაქტერიაა, მაგრამ ხშირად აშკარად არ არის შეღებილი.
- მცირე, გამხდარი ბაქტერიები, როგორიცაა ტრეპონემა, ქლამიდია და რიკეტცია spp. ძნელია შეღებვა გრამის მეთოდით.
ნაბიჯი 7. გადაყარეთ დარჩენილი სახარჯო მასალები და აღჭურვილობა
ნარჩენების გატანის ეს პროცედურა განსხვავდება ლაბორატორიებს შორის და დამოკიდებულია გამოყენებული მასალებზე. როგორც წესი, შეღებვის უჯრაში არსებული სითხე იშლება ბოთლებში, სადაც აღინიშნება საშიში ნარჩენები. ჩაასხით სლაიდები 10% -იან გამათეთრებელ ხსნარში, შემდეგ გადაყარეთ მკვეთრი კონტეინერში.
Რჩევები
- დაიმახსოვრე, რომ გრამის ლაქის შედეგები კარგი იქნება მხოლოდ იმ შემთხვევაში, თუ ნიმუში კარგია. მნიშვნელოვანია პაციენტების ინფორმირება ისე, რომ მათ შეძლონ კარგი ნიმუშის მიცემა (მაგ., განსხვავება ნახველსა და ღრმა ხველას შორის ნახველის ნიმუშის მისაღებად).
- როგორც ფერადი გაუფერულება, ეთანოლი უფრო ნელა რეაგირებს ვიდრე აცეტონი.
- დაიცავით სტანდარტული ლაბორატორიული წესები უსაფრთხოების უზრუნველსაყოფად.
- პრაქტიკაში გამოიყენეთ ლოყა, რადგან ის შეიცავს გრამდადებით და გრამუარყოფით ბაქტერიებს. თუ ხედავთ მხოლოდ ერთი ტიპის ბაქტერიას, თქვენ შეიძლება იყენებდეთ ძალიან ცოტა ან ძალიან ბევრ მათეთრებელს.
- თქვენ შეგიძლიათ გამოიყენოთ ხის სამაგრები სლაიდების დასაფიქსირებლად.
გაფრთხილება
- აცეტონი და ეთანოლი აალებადი ნივთიერებებია. აცეტონი ამოიღებს ზეთს თქვენი ხელიდან, რაც თქვენს კანს გაუადვილებს სხვა ქიმიკატების შეწოვას. ატარეთ ხელთათმანები და გამოიყენეთ ისინი ფრთხილად.
- არ დაუშვათ ნაცხის გაშრობა გრამ ლაქის ან ლაქის გაწმენდის წინ.
Რა გჭირდება
- ქსელის ნიმუში
- შუშის სლაიდი
- პიპეტი
- მცირე ცეცხლის წყარო, ან გამათბობელი, ან მეთანოლი
- წყალი
- ბროლის იისფერი
- იოდი
- ფერადი გაუფერულება, როგორიცაა ალკოჰოლი ან აცეტონი
- საფრანინი
